別府亀の井ホテル（べっぷかめのいホテル）は、大分県別府市の別府八湯のうちの別府温泉にある大型リゾートホテルである。別府観光の父と呼ばれる油屋熊八によって1911年（明治44年）10月に創業された亀の井旅館を前身とする。1924年（大正13年）11月に洋式ホテルに改装して亀の井ホテルとなるとともに、運営会社の株式会社亀の井ホテルを設立。1953年（昭和28年）8月に別府市初の政府登録旅館となり、1972年（昭和47年）12月には政府登録ホテルとなった。。1994年（平成6年）5月に運営会社がジョイフルに買収されると、翌1995年（平成7年）12月にはホテル新築のため休業して旧ホテルの取り壊しを開始。1997年（平成9年）7月に現在の本館が竣工した。本館は、客室総数322室、建坪6,000坪、17階建てと、別府市にあるホテルの中で2番目に大きく、最も高い。運営会社は2000年代に入るとビジネスホテルチェーンを展開。当ホテルは業態は変わらなかったものの、2010年（平成22年）頃に亀の井ホテル別府店に名称を変更した。2013年（平成25年）3月には運営会社が株式会社亀の井ホテルから株式会社アメイズに商号を変更。2014年（平成26年）10月29日をもってMonza特定目的会社に40億円で売却され、同日からナクアホテル&リゾーツマネジメントが運営を受託し、新設された別府ホテル・マネジメント合同会社に引き継がれた。また、この売却時に名称を別府亀の井ホテルに戻している。館内にあったジョイフル亀の井店は引き続き営業していたが、2016年8月31日限りで閉店している。

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